[자연과학] 일반생물학 實驗(실험) - Polymerase chain reaction(PCR)
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작성일 20-09-24 06:04
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이 세균의 DNA polym…(skip)
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실험결과/생물의학
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다. 따라서, 증폭시킬 DNA sequence의 양 끝에 상보적으로 결합할 수 있는 작은 DNA조각(oligonucleotide primer)을 함께 넣어주면 이 primer가 특정 DNA sequence의 양 끝에 가서 결합(anneal)해 DNA polymerase가 DNA 합성을 스타트할 수 있도록 해준다. 이 PCR techinique은 유전자를 연구, analysis(분석) 하는 분자유전학에 혁신을 일으켰다. 유전자를 analysis(분석) 하고 연구하는데 있어서 가장 큰 drawback(걸점)은 복잡한 전체 genome중에 연구하고자 하는 유전자가 희귀하다는 것인데, PCR은 특정 DNA Sequence의 copy수를 기하급수적으로 증폭시킬 수 있다
PCR은 DNA polymerase에 의한 DNA 복제의 특징을 이용한다.
Polymerase chain reaction(PCR) technique은 1980년대 중반 K. Mullis에 의해서 고안된 기술이다. 일단 primer가 결합한후에는 DNA polymerase의 작용으로 DNA 합성이 반대편 끝까지 진행(extend)된다 이렇게 1)denature, 2)anneal, 3)extend가 한 cycle이 된다 다음 cycle에서 original DNA와 새로 합성된 DNA가 분리되어 외가닥 DNA 주형이 된다 따라서, n cycles 후에, 理論적으로 2n의 두가닥 DNA가 존재하게 된다
DNA를 변성시키면 DNA polymerase 도 같이 변성되므로 매 cycle마다 DNA polymerase를 넣어주어야 했었다. 이러한 외가닥 DNA는 두가닥 DNA를 끓임(denature, 변성)으로써 간단하게 얻을 수 있다 DNA polymerase가 DNA합성을 스타트하게 위해서는 스타트부위가 두가닥 DNA로 되어 있어야한다. DNA polymerase가 외가닥 DNA를 주형으로 해서 상보적인 DNA를 합성한다. 그러나, Thermus aquaticus라는 온천에 사는 세균이 발견되면서 이 문제는 해결되었다.
