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단백질정량

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작성일18-08-24 16:59

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표준곡선을 결정하는 데 사용한 단백질이 나타내는 색의 세기와 다를 수 있다 그럼에도 불구하고 이 방법은 단백질을 정제하는 과정에 있어서 단백질의 함량change(변화)를 측정(measurement)하는 데는 매우 유용한 방법이다. 많은 단백질들에 있어서의 이 아미노산들의 합친 수준은 거의 일정하므로 단백질의 농도는 280nm에서의 흡광도와 비례하게 된다 물론 예외가 있기는 하지만 순수한 단백질의 경우 단백질의 농도가 1mg/ml이고 자외선이 통과하는 경로가 1cm 일 때 280nm에서의 흡광도는 1.0이다. 단백질에 의해 환원 된 구리 이온은 BCA용액과 reaction 을 해서, 보라빛의 화합물을 생성하게 된다 이 화합물은 빛의 특정 영역(562nm)에서 구리 이온이 담긴 용액과 BCA용액 각각보다 빛의 흡수율이 높기에, spectrophotometer를 사용해서 측정(measurement)하면 흡수율 차이를 측정(measurement)할 수 있다 단백질의 양이 많으면 보다 많은 보랏빛 화

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다. 이 두 아미노산의 함량은 단백질의 종류에 따라서 상당히 다르므로 1mg의 단백질에 대한 색의 세기가 일정하지가 않다. 그 대신에 단백질은 체내에 필수적인 중요한 물질들을 만들거나 운반하고, 또는 외부로부터 이물질과 대항해 싸우기도 하며 나아가서는 뼈, 근육과 연결조직을 이루기도 한다. 따라서 대부분의 순수한 단백질의 농도는 280nm 에서의 흡광도를 측장함으로써 …(省略) 신속히 결정할 수 있다 이 방법은 정량하는 데 시간이 적게 들 뿐만 아니라 정량하고 난 후의 단백질을 완전히 회수하여 재이용할 수 있는 이점이 있다 자연물들에는 280nm에서 흡광을 나타내는 그 밖의 화합물들이 많이 있다 특히 핵산은 260nm에서 최대 흡수를 가지고 있지만 280nm에서도 흡광도가 상당히 크다.


단백질 정량

단백질 정량이란 시료 내에 포함된 단백질의 양, 또는 농도를 구하는 과정으로써 대부분의 생화학實驗의 기본이 되는 과정이라고 할 수 있다 생물학 분야의 경우 다른 분야보다 결과를 볼 때 까지 뭔가가 잘못 되었다는 것을 알기 어려워, 준비 단계에서의 단백질 정량이 잘못 이루어지면 헛수고를 하거나 잘못된 결과를 얻을 수 있다 이러한 이유 때문에 단백질 정량을 정확하게 하는 것은 매우 중요하다. 그러나 단백질은 탄수화물이나 지방 두 영양소와는 달리 신체에서 에너지를 내는데 쓰이지 않는다. 또 혈액을 응고시키는 데에도 여러가지 종류의 단백질이 필요하다.

3.BCA
Bicinchoninic Acid Assay. Pierce방식이라고도 함.
샘플내에 있는 단백질 양을 측정(measurement)하고자 할 때 쓰이는 것으로서, 단백질이 구리 이온(Cu 2+, Cu 1+)을 환원시킬 수 있는 성질을 이용한다. 그러므로 A280/A260을 알면 280nm에서의 핵산의 흡광에 대한 보정을 할 수 있다


2.Lowry
Lowry등이 고안한 이 단백질 정량analysis(분석) 법은 용액에 있는 단백질뿐 아니라 건조된 시료에도 이용될 수 있다 특히 이 정량방법은 5ug/ml정도의 단백질 양을 정량할 수 있는 대단히 민감한 방법이어서 널리 쓰이고 있다 이 Lowry 방법에서 사용하는 Folin-Ciocalteau시약에 의한 발색은 뷰렛 시험에서와 마찬가지로 단백질과 알칼리성 구리와의 reaction 과 포스포몰리브덴산-포스포텅스텐산 염들이 단백질에 있는 티로신과 트립토판 들에 의한 환원reaction 으로 생긴다.

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단백질정량

[예비보고서]

94462 수의예과 신선호

단백질 정량


단백질

단백질은 생명체의 구조와 생리 활성을 담당하는 point component으로 수십 개 이상의 아미노산이 펩티드 결합으로 연결된 구조를 말한다. 또한, 정확성 뿐만 아니라, 대부분의 實驗에서 반복적으로 사용하게 되므로, 간편성 역시 중요하게 여겨지기 때문에, 實驗에 따라서 다양한 단백질 정량 방법이 사용되고 있다


단백질 정량 實驗의 종류

1. 분광학적 정량법(A280)
단백질에 있는 티로신, 페닐알라닌 및 트립토판 잔기들은 각각 275nm와 280nm의 자외선을 흡수한다. 단백질은 신체의 구성기능과 에너지를 내는 기능의 두 가지 면에서는 탄수화물이나 지방과 같다.

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